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使用激光共聚焦显微镜之前有那些准备工作

返回列表 来源:本站 发布日期:2024-09-11 13:44:08【

使用激光共聚焦显微镜之前的准备工作主要包括以下几个方面:

一、设备检查与准备

电源与连接检查:

确保电源线和数据线连接正常,以保证设备供电和数据传输的稳定性。

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激光源检查:

检查激光源是否正常工作,激光功率是否稳定,这是确保成像质量的关键。

镜头与滤光片清洁:

检查镜头和滤光片是否清洁,清除灰尘和污渍,以保证成像的清晰度和准确性。

软件与硬件检查:

确保系统软件正常运行,检查镜头和滤光片的安装是否正确,确保成像时的光路通畅。

二、样品准备

载玻片与盖玻片处理:

选择质量好、光洁、无杂质的载玻片和盖玻片。对于重要实验,需提前检查其光学特性,确保无荧光干扰。

盖玻片的厚度应小于0.17mm,使用前需经过玻璃洗液浸泡处理一天以上,铬酸浸泡过夜,去离子水冲洗后,再用无水乙醇浸泡待用。临用前需在酒精灯上过火灭菌处理。

样品制备:

细胞样品:细胞爬片制备需确保细胞贴壁牢固,对于贴壁不牢的细胞或特定研究,需预先包被细胞外基质。也可使用玻璃底的共聚焦专用培养皿进行细胞接种。

组织样品:实验标本需为单层,并能很好地贴附在样品池中,无论是石蜡切片还是冰冻切片,均应尽量薄。用于免疫荧光抗体标记的组织切片还需经过特殊处理以防止脱落。

样品标记与固定:

样品需经荧光探针标记(可单标、双标、三标),并使用适当的固定剂和封片剂进行处理。

三、系统启动与设置

系统启动:

按下电源按钮,等待系统启动。检查系统软件是否正常运行,如有异常及时联系维修人员。

激光源开启与设置:

开启激光源,根据需要选择合适的激光波长和功率。

物镜与扫描镜调节:

调节扫描镜和物镜的位置,使光线准确聚焦在样品上。

四、安全注意事项

在整个准备过程中,需严格遵守实验室安全规范,避免直接接触激光光束以防止对眼睛造成伤害。

注意防止液体样品溢出到设备中,以免损坏设备和危及人身安全。

综上所述,使用激光共聚焦显微镜前的准备工作涉及设备检查、样品准备、系统启动与安全注意事项等多个方面,确保这些步骤的正确执行对于获得高质量的成像结果至关重要。